《核酸實驗室建設》作者： 李文杰摘要： 隨著醫(yī)學科學的發(fā)展，分子生物學技術的應用越來越廣泛。目前臨床檢驗中常用的核酸包括dna、rna和蛋白質等，而用于檢測的主要是dna。在核酸檢測中，由于技術手段的不同及對結果的要求不同，其操作過程也各不相同。本文主要介紹幾種常見的技術方法及其各自的特點和應用范圍。

1.pcr擴增法 pcr（polymerase chain reaction）即聚丙烯酰胺鏈式反應，是體外擴增基因的一種常用技術。該技術在20 世紀60年代開始應用于臨床檢驗工作，70年代以來發(fā)展迅速，20世紀80年代末已進入大規(guī)模應用階段；目前已成為分子診斷學中的常規(guī)技術之一。 pcr的原理是將待測標本中的dna片段用特異性的引物進行標記后加入到含有模板dna的緩沖液中進行聚合酶反應以獲得大量的目的產物-探針mrna（tag）。然后根據需要將探針與靶序列進行雜交或直接測定靶序列上的特定核苷酸含量來判定是否發(fā)生了突變或者修飾變異從而做出相應的判斷和處理措施[1] 。

2.熒光定量pcr 熒光定量pcr（q antitative q antitive pcr）是在普通定性pcr的基礎上發(fā)展起來的新的定量分析手段和方法[2] 。它通過使用特異性染料使被測標本中的目標蛋白發(fā)生顏色變化來反映其在細胞內存在的數量[3] 。該方法具有靈敏度高、重復性好等特點[4] ，是目前國際上最先進的方法之一[5] ，廣泛應用于病原微生物感染的診斷和疾病的輔助診斷等方面 [6] 。

3.實時熒光定量pc r 實時熒光定量pc r （real time q antitative pc r）[7] 是在傳統(tǒng)實時熒光定量pc r 的基礎上結合計算機處理系統(tǒng)研制開發(fā)的新一代快速、準確的病毒載量的檢測方法 [8] 。該方法采用多組份混合樣本預處理方法 [9] 、高靈敏度抗體免疫捕獲技術和新型雙光子激發(fā)體系 [10] 等先進技術 [11] ，能夠有效地克服傳統(tǒng)實時熒光定量PC R 中存在的問題 [12] ，如假陽性率高 [13] 、靈敏度低 [14] 、試劑盒成本高等缺點 [15] ；同時大大縮短了實驗時間和提高實驗準確性 [16] ；此外還具備操作簡單、自動化程度高 [17] 等優(yōu)勢 [18] 。